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          TUNEL技術(shù),即脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶( Terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT )介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL ) 技術(shù), 是目前原位檢測(cè)細(xì)胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法, 已廣泛用于生物、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。
          TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一種用來檢測(cè)細(xì)胞凋亡(apoptosis)的分析方法.細(xì)胞凋亡有一項(xiàng)重要的特征為細(xì)胞內(nèi)的DNA會(huì)碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探測(cè)DNA片段的產(chǎn)生,所以可以傳達(dá)細(xì)胞凋亡的訊息.TdT為terminal deoxynucleotidyl transferase,此種酵素可以在沒有DNA模板的情形下,連結(jié)核甘酸到DNA的3'-OH處.1992年,以色列科學(xué)家Gavrieli等人將TdT引為為標(biāo)定DNA片段的一個(gè)酶,自此衍生出TUNEL此項(xiàng)技術(shù).TUNEL的好處是可以在細(xì)胞凋亡發(fā)生的早期,即可偵測(cè)到DNA片段的產(chǎn)生,并且可以直接使用在組織切片上,觀察細(xì)胞凋亡發(fā)生的位置.所以TUNEL目前為廣泛接受與使用的一種細(xì)胞凋亡的分析方法。
      細(xì)胞凋亡的研究方法有形態(tài)學(xué)方法、DNA電泳、末端標(biāo)記技術(shù)凋亡細(xì)胞膜改變分析、細(xì)胞凋亡酶學(xué)分析和流式細(xì)胞儀分析方法(flow cytometry, FCM)等。以往對(duì)細(xì)胞凋亡的研究常常采用形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行研究,如光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡來觀察,以出現(xiàn)凋亡小體即判斷為凋亡細(xì)胞。但這種現(xiàn)象出現(xiàn)晚,對(duì)凋亡細(xì)胞亦難以做出精確的定量分析。DNA聚合酶I、Klenow酶介導(dǎo)的原位末端標(biāo)記技術(shù)和TdT酶介導(dǎo)的生物素化dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)(terminal oxynucleotidyl transferase mediated dUTP biotin nick end labeling, TUNEL )是近年來發(fā)展出現(xiàn)的細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)技術(shù)。細(xì)胞凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與DNA斷裂點(diǎn)數(shù)目相同的3′-OH末端。原位末端標(biāo)記技術(shù)可以檢測(cè)到形態(tài)改變之前的凋亡細(xì)胞,敏感性高,特異性強(qiáng),為凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)提供了基礎(chǔ)。
      末端原位雜交/TUNEL/整體實(shí)驗(yàn)/威斯騰生物
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